Kémia | Tanulmányok, esszék » Szabó Teréz - A haemostasis laboratóriumi vizsgálata

A haemostasis laboratóriumi vizsgálata Szabó Teréz A haemostasis physiologiája • Az érpálya integritása – áramlási viszonyok, endothel funkció • Celluláris tényezők – thrombocyták, fehérvérsejtek, vörösvérsejtek • Humorális tényezők – alvadási faktorok, inhibitorok, fibrinolízis Az endothel néhány fontosabb jellemzô tulajdonsága • • • • • • • egységes védő réteg anticoaguláns - Protein C aktiváció antithrombotikus - prostacyclin prothrombotikus - vWF relaxáns - NO fibrinolysis - tPA, PAI cytokinek, adhesiv molekulák - selectinek (leukocyta, tumor sejt adherencia) A homocystein anyagcseréje Methionin THF CH2THF MTHFR DMG SAM MetioninBHMT ciklus Folát- B12 ciklus MS Betain CH3THF Homocystein CBS B6 Cystathionin Cystein B6 SAH Transsulfuratio SO42- S DNS RNS Protein S-CH3 Thrombocyták • • • • 2-4 u átmérőjű discoid alakú részecskék Szám: 150 – 400 G/L Eredete: csontvelői

megakaryocyták Szerepe: elsődleges vérzéscsillapítás az alvadási folyamatok szabályozása az alvadék stabilizálása, sebgyógyulás A thrombocyta aktiváció folyamata • • • • • • Adhesio Alakváltozás Secretio – „release reakció” Aggregatio (Procoaguláns aktivitás) Retractio Aktivált thrombocyták Az alvadási rendszer plazmafaktorai • Közös jellemzôik: • Többnyire a májban termelôdnek • glikoproteinek • a plazmában inaktiv prekurzoraik keringenek • aktiválásukhoz valamilyen (intrinsic vagy extrinsic) aktivációs folyamat szükséges • működésüket pozitív és negatív feedback, valamint természetes inhibitorok szabályozzák Funkcionális csoportosítás • contact faktorok: FXI, FXII, praekallikrein (PK), nagy molekulatömegű kininogén (HMWK) • az alvadási kaszkád enzimei - (K vitamin) Prothrombin (pre-FII), FVII, FIX, FX • kofaktorok - az enzimek aktivitását modifikáló glikoproteinek: FV,

FVIII és a fibrinogén, mint végsô szubsztrát • nem fehérje természetű járulékos faktorok (Ca2+, foszfolipid) Az alvadási rendszer aktivációja „Intrinsic” út „Extrinsic”út FXI FXIIa FXIa Szöveti faktor/FVIIa FIXa FIX FXa FX FXIII FIIa (thrombin) FII (prothrombin) Fibrinogén Fibrin FibrinX FXIIIa Természetes anticoagulansok • • • • • • • • feedback gátlás - pl. FVIIIa, FVa lebontása AT-III - thrombin, X faktor, IX faktor Heparin cofactor-II Alfa-1 antitripsin - tripsin, elastase Alfa-2 macroglobulin - nem specifikus Protein-C, Protein-S az extrinsic út inhibitora (TFPI) C1-esterase inhibitor Az „extrinsic” út gátlása Az antithrombin molekula szerkezete és működése A Protein C rendszer APC rezisztencia Leggyakoribb (>95%) oka az V. faktor „Leiden” típusú mutációja (506 Arg Glu) Ritkábban az V. faktor más genetikai eltérései (FV Cambridge 306 Arg Thr, FV Hong Kong 306 Arg

Glu) esetleg a FVIII genetikai defektusa okozza Fibrinolysis •A plasminogen extrinsic (szöveti plg aktivátor, urokinase), intrinsic (FXII - PK - HMWK) ill. gyógyszeres (streptokinase) aktivációja plasminná. Plasmin-hatás •- fibrinolysis •- fibrinogenolysis •hasítási termékek: FDP-k, D-Dimer •természetes plasmin inhibitor: alfa-2 antiplasmin LABORATÓRIUMI DIAGNOSZTIKA 1. Indikáció 1. vérzés okának megállapítása 2. thrombosis, embolia 3. antithrombotikus therapia követése 4. örökletes hzavarok kivizsgálása, gondozás 5. belgyógyászati betegek kivizsgálása 6. műtét előtti kivizsgálás 7. szülészeti komplikációk (DIC veszély) 8. DIC Thrombosis, embolia diagnosztika NEM laboratóriumi diagnózis! • a thrombin aktiválódás biokémiai markerei Fibrinopeptid A és B thrombin-antithrombin (TAT) komplex • plasmin aktiválódás biokémiai markerei plasmin-antiplasmin (PAP) komplex FDP, X,Y,D,E fragmentek, D-dimer Message

Board Malar/Butterfly rash Lupus store Site updates Email Home Lupus information Lupus FAQ Lupus factsheets Lupus symptoms Diagnosis/ Tests Treatment Practical info The Challenges of Lupus: Lupus news Insights & Hope Surveys (UK customers) Whos Who Sitemap Links Awards Lupus email list Read our privacy policy The Lupus Book (UK customers) Please help to support this site by visiting our Store The Lupus Site copyright 1997/1998/1999/2000 by Joanne Forshaw. None of my material can be used on any other site, or in any other form, without prior permission from the author. However feel free to link to my site from yours. The Lupus Site is not affiliated in any way with Lupus UK The information on this page is only for general advice. No responsibility can be taken for anything that happens as a result of following or ignoring advice on this site Search Lupus Anticoaguláns • In vitro anticoaguláns, in vivo thrombogén • Autoantitest (IgG, IgM, IgA) • Változó

specifitás LAC – lupus anticoaguláns aCL – anticardiolipin APA, aPL – antifoszfolipid antitest Anti-béta2-GP I Faktor-ellenes LA (prothrombin, PC, PS, TFPI.) Laboratóriumi vizsgálatok • 1. 2. 3. 4. Szűrőtesztek: LA érzékeny APTI Hígított thromboplastin idő Kaolin alvadási idő (KCT) Hígított Russel Vipera méreg alv. Idő (DRVVT) Laboratóriumi vizsgálatok • Megerősítő tesztek 1. A foszfolipid függés bizonyítása (DRVVT confirm. teszt, PNP, PTT hexagonális foszfolipid jelenlétében) 2. Antitestek kimutatása ELISA módszerrel (aCL, aPL, aPS, aPI – IgG,A,M; aß2GPI) • A megerősítő vizsgálat a szűrőteszttel azonos specifitású legyen • Két független vizsgálat pozitív eredménye – 6 hét különbséggel – szükséges a diagnózishoz Antithrombotikus/antikoaguláns therapia monitorozása - antithrombocyta szerek - thrc.funkció thrombolysis - FDP, fibrinogen, TI, Plg heparin - APTI, thrombocyta szám frakcionált

vagy kis molsúlyú heparinok anti-Xa aktivitás, thrombocyta szám - kumarin származékok: PI ( APTI) LABORATÓRIUMI DIAGNOSZTIKA 2. Diagnosztikai csoportosítás • 1. Általános vagy szűrőtesztek • - vérzési idő, teljes vér alvadási idő, thrombocyta szám • - PI, APTI, TI, fibrinogén • - thrombelastographia Diagnosztikai csoportosítás 2. Speciális vizsgálatok faktor meghatározások - egy illl. kétlépéses, inhibitor-kimutatás - faktor specifikus, foszfolipid-függő a thrombin aktiválódás biokémiai markerei Fibrinopeptid A és B thrombin-antithrombin (TAT) komplex Diagnosztikai csoportosítás (folyt) plasmin aktiválódás biokémiai markerei plasmin-antiplasmin (PAP) komplex FDP, X,Y,D,E fragmentek, D-dimer fibrinolysis vizsgálata euglobulin lízis idő, provokációs próba tPA, PAI-1 meghatározás Diagnosztikai csoportosítás 3. DIC panel thrombocyta szám, perifériás kenet (fragmentocyták) alvadékmegfigyelés PI, APTI,

TI/fibrinogén FM, FDP, D-dimer D-dimer meghatározás Módszerek • Szemikvantitatív • Kvantitatív Jelentős NEGATÍV prediktív érték A D-dimer emelkedhet • Fokozott fibrinolitikus aktivitással járó fiziológiás terhelés (sport, edzés) • Életkor (újszülött, idős) • Menstruáció, terhesség (3 – 4x!) szülés • Műtét, sebgyógyulás • Intravasc. stasis (varicositas, utazás) • Vérömleny felszívódása Diagnosztikai csoportosítás 4. Antithrombotikus/antikoaguláns therapia monitorozása - antithrombocyta szerek - thrc.funkció - thrombolysis - FDP, fibrinogen, TI - heparin - APTI, thrombocyta szám - frakcionált vagy kis molsúlyú heparinok anti-Xa aktivitás, thrombocyta szám - kumarin származékok: PI ( APTI) Metodikai csoportosítás 1.Aktivitás meghatározása Alvadás-végpontú - “clotting” módszerek Szintetikus peptidekkel - kromogén tesztek 2.Tömeg mérése immunkémiai módszerek- ELISA, EIA

A prothrombinase komplex Xa Pre-2 F1 Va P.BTracy and KGMann Human Pathol18:162 (1987) PTR - based Fibrinogén LS 100% 50% 25% Δ Arányos a fibrinogén koncentrációval Idő PTR kalibrációs görbék Metodikai .(folytatás) 3.Elektroforézis - ATIII variánsok - vWF multimer analizis 4.Gyorstesztek - kvalitatív, szemikvantitatív agglutináció 5.Molekuláris biológiai módszerek - örökletes zavarok - tudományos kutatás Családvizsgálat +51é, AMI 79é. 50-58 éves testvérek 52é. FVL:+/PT20210:+/S.O5é FVL:+/+ PT20210:+/- 46é. FVL: +/MTHFR: +/- S.B 9é FVL: +/+ MTHFR:+/- P.F „vérzékeny” Hibaforrások, interpretációs problémák Hosszan tartó pangatás (a vérvétel sorrendje) Nem megfelelő vér/citrát arány (1 rész Nacitrát + 9 rész vér. Eltérni tilos! Kivétel: kifejezett haemoconcentratio: 0.6 körüli haematocrit, vagy extrém anaemia - 0.3 alatti htc) Heparin - terápia következtében vagy szennyeződésként a mintában

Hibaforrások (folytatás) vérvétel és a feldolgozás között eltelt idő (a plazmát a sejtektôl fél órán belül el kell választani. Feldolgozás 2-4 órán belül történjen) tárolás, centrifugálás módja analitikai hiba metodikai különbségek - reagensek, műszerek Standardizációs törekvések: A prothrombin aktivitás megadásának nemzetközi standard egysége az INR. Értelmezése: az orális anticoaguláns kezelésben részesülô beteg prothrombin idejének és a normál plazma prothrombin idejének hányadosát (prothrombin ráta, “R”) az alkalmazott reagensre jellemzô érzékenységi faktorral (International Sensitivity Index, “ISI”) hatványozzuk. INR=RISI